Ապրանքներ

5-ֆտորուրացիլի (5-FU) և երկու էնդոգեն մոնոֆոսֆատ նուկլեոտիդների մի քանի մետաբոլիտներ քանակականացնելու համար մենք մշակեցինք օրիգինալ մեթոդ, որը հիմնված է հեղուկ քրոմատոգրաֆիա-տանդեմ զանգվածային սպեկտրոմետրիայի վրա (LC-MS/MS):Այս փորձարկումը թույլ տվեց որոշել՝ (i) 5-FU-ից կամ 5-fluoro-2'-deoxyuridine-ից (5-FdUrd) 5-ֆտոր-2'-դեզօքսյուրիդին-5'-մոնոֆոսֆատ (5-FdUMP) ներբջջային արտադրությունը: , (ii) 5-FdUMP կոնցենտրացիայի ազդեցությունը ներբջջային 2'-դեօքսյուրիդին-5'-մոնոֆոսֆատ (dUMP)/թիմիդին-5'-մոնոֆոսֆատ (TMP) հարաբերակցության վրա, և (iii) 5-FdUMP-ի սեկրեցիայի չափը և 5-FU մարդկային աճեցված բջիջներից ABC փոխադրողների միջոցով:Մեր փորձարարական պայմաններում բջիջները ինկուբացվել են 5-FU կամ 5-FUrd-ով:Այնուհետև բջջային սպիտակուցները նստեցվեցին մեթանոլով:Այս ընթացակարգը ապահովեց բարձր արդյունահանման վերականգնում:Բացի այդ, բջիջներից 5-FU և 5-FdUMP սեկրեցումը չափելու համար մենք իրականացրեցինք այդ մոլեկուլների քանակական հաշվարկը կուլտուրայի միջավայրում:Մեդիաները կամ ուղղակիորեն ներարկվել են (5-FU) կամ անցել են պինդ փուլային արդյունահանման՝ օգտագործելով Oasis Wax արդյունահանման քարթրիջը (5-FdUMP):Անալիտների տարանջատումը կատարվել է dC18 Atlantis 3,5 մկմ, (100 մմ × 2,1 մմ id) սյունակի վրա՝ իզոկրատական ​​ռեժիմով, օգտագործելով ամոնիումի ֆորմատի բուֆեր/մեթանոլ/ջուր (5/5/90, v/v) որպես շարժական փուլ:Գործարկման ժամանակը չի գերազանցել 6,2 րոպեն:Անալիտները իոնացվել են էլեկտրասփրեյի միջերեսում՝ բացասական իոնային ռեժիմում:Մենք վավերացրել ենք մեթոդը 2,5–150 նգ մլ −1 միջակայքում՝ համաձայն միացությունների:Յոթ օրվա ընթացքում 10%-ից ցածր փոփոխականությունը եղել է ներ և միջվերլուծական:Բոլոր միացությունները կայուն էին բջիջներում կամ կուլտուրայի միջավայրում, երբ նմուշները պահվում էին -20 °C ջերմաստիճանում առնվազն երկու շաբաթ և երեք սառեցման-հալման ցիկլերից հետո:Երկու միջավայրերում էլ մատրիցային էֆեկտ չի նկատվել: