Ապրանքներ

Գլիկոզիլտրանսֆերազների նոր բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի վերլուծություն՝ հիմնված անտրանիլաթթվով դերիվատացման և ֆլուորեսցենտային հայտնաբերման վրա:

Փորձարկումները մշակվել են՝ օգտագործելով 2-ամինոբենզոյաթթվի (2AA; անտրանիլաթթու, AA) պիտակավորման եզակի քիմիան՝ ինչպես β1-4 գալակտոզիլտրանսֆերազի (GalT-1), այնպես էլ α2-6 սիալիլտրանսֆերազի (ST-6) ակտիվությունը չափելու բարձր արդյունավետ հեղուկով: քրոմատագրություն (HPLC) ֆլուորեսցենտային հայտնաբերմամբ (Anumula KR. 2006. Advances in fluorescence derivatization metodas for high-performance liquid chromatographic analysis of glycoprotein carbohydrates. Anal Biochem. 350:1-23):N-ացետիլգլյուկոզամինը (GlcNAc) և N-ացետիլլակտոզամինը օգտագործվել են որպես ակցեպտորներ, իսկ ուրիդին դիֆոսֆատ (UDP)-գալակտոզ և ցիտիդին մոնոֆոսֆատ (CMP)-N-ացետիլնևրամինաթթու (NANA) որպես դոնորներ համապատասխանաբար GalT-1-ի և ST-6-ի համար:Ֆերմենտային արտադրանքները in situ պիտակավորվել են AA-ով և բաժանվել ենթաշերտերից TSKgel Amide 80 սյունակի վրա՝ օգտագործելով նորմալ փուլային պայմաններ:Ֆերմենտային միավորները որոշվել են գագաթնակետային տարածքներից՝ համեմատելով Gal-β1-4GlcNAc և NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc միաժամանակ ածանցյալ ստանդարտների հետ:Հաստատվել է վերլուծությունների գծայնությունը (ժամանակը և ֆերմենտի կոնցենտրացիան), ճշգրտությունը (ներ և միջվերլուծություն) և վերարտադրելիությունը:Պարզվել է, որ վերլուծությունները օգտակար են մեկուսացման և մաքրման ընթացքում ֆերմենտների գործունեության մոնիտորինգի համար:Փորձարկումները շատ զգայուն էին և կատարվեցին հավասար կամ ավելի լավ, քան ռադիոակտիվ շաքարի վրա հիմնված ավանդական չափումները:Վերլուծության ձևաչափը կարող է օգտագործվել նաև այլ տրանսֆերազների ակտիվությունը չափելու համար, պայմանով, որ ածխաջրածին ընդունիչները պարունակեն պիտակավորման համար նվազեցնող ծայր:Գլիկոպրոտեին ընդունողների համար վերլուծություն է մշակվել՝ օգտագործելով IgG:Մշակվել է HPLC պրոֆիլավորման կարճ մեթոդ IgG գլիկանների բաժանման համար (երկտարենային G0, G1, G2, մոնո- և դիզիալացված), որը հեշտացրել է GalT-1 և ST-6 ակտիվության արագ որոշումը:Ավելին, պրոֆիլավորման այս մեթոդը պետք է օգտակար լինի կլինիկական պայմաններում IgG գլիկանների փոփոխությունների մոնիտորինգի համար: